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    稀釋法是體外定量測定抗菌藥物抑制待測菌生長活性的方法。根據(jù)稀釋培養(yǎng)基的不同，分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。瓊脂稀釋法是細菌藥敏試驗的金標(biāo)準(zhǔn)。稀釋法所測得的某抗菌藥物抑制待測菌生長的最低濃度為最低抑菌濃度（MIC），稀釋法也可測定最小殺菌濃度（MBC）。

    作為第三方檢測中心，中科檢測機構(gòu)擁有CMA和CNAS認(rèn)證檢測資質(zhì)，檢測設(shè)備齊全，數(shù)據(jù)科學(xué)可靠，可出具國家認(rèn)可的細菌藥敏試驗報告。

    稀釋法測定原理

    以水解酪蛋白（M-H）液體培養(yǎng)基將抗菌藥作不同濃度的稀釋，然后接種待測菌，定量測定抗菌藥物抑制該菌的最低濃度（MIC）或殺死該菌的最低（或最小）殺菌濃度（MBC）。

    稀釋法測定材料

    （1） 抗菌藥物原液的配制：配制各種抗菌藥物原液的溶劑一般為蒸餾水、磷酸鹽緩沖液或乙醇等，穰釋劑多為蒸餾水。配制時需用標(biāo)準(zhǔn)粉劑并了解其效力（效價），用下列公式計算配制抗菌藥物原液一定濃度所需要標(biāo)準(zhǔn)粉劑的毫克數(shù)。

    A：稱取標(biāo)準(zhǔn)粉劑的毫克數(shù)

    B：稀釋劑的毫升數(shù)

    C：貯存液的濃度（即原液濃度，U/ml或μg/ml）

    D：標(biāo)準(zhǔn)粉劑的有效力（即效價，U/mg或μg/mg）

    最后，原液以過濾法除菌，小量分裝使用。大部分抗菌藥物原液在-20℃以下可保存三個月，而在4℃以下只能保存一周。

    （2）培養(yǎng)基：一般細菌采用M-H液體培養(yǎng)基；鏈球菌和嗜血桿菌屬除培養(yǎng)基為液體外，其他需補充的成分均同K-B法。

    （3）接種菌液的制備：在已分純的待測菌平板上挑取4～5個形態(tài)相同的菌落接種于3～5ml M-H液體培養(yǎng)基內(nèi)，35℃培養(yǎng)4～6h；鏈球菌屬和嗜血桿菌屬的細菌需接種于含血液的M-H液體培養(yǎng)基，35℃培養(yǎng)過夜，校正菌液濃度，使其相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)，再用M-H液體培養(yǎng)基按1：200稀釋后備用。稀釋后的菌液應(yīng)在15min內(nèi)接種。

    稀釋法實驗步驟

    （1）排列試管10～15支，除第一支外，每管加人M-H液體培養(yǎng)基lml。

    （2）先吸取抗菌藥物原液（1000μg/ml）5.12ml加入液體4.88m1中，混合，吸出分別加入第一管和第二管中，每管1ml，第二管經(jīng)混合后吸出1ml，加入第三管中，依次類推至第十五管后，吸出1ml棄去，這樣各管抗菌藥物的最終含量依次為512、256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.13、0.06、0.03μg/ml。另設(shè)培養(yǎng)液對照，檢測菌生長對照和質(zhì)控菌生長對照管各一支。

    （3）將已校正濃度的待測菌懸液依次加入含藥管內(nèi)，每管0.05ml，混勻。各試管置35℃培養(yǎng)12～18h后觀察結(jié)果。每次以同法作對照菌的藥敏試驗。

    稀釋法結(jié)果判讀：

    最低抑菌濃度（MIC）：凡無肉眼可見細菌生長的藥物最低濃度即為該待測菌MIC。

    最低殺菌濃度（MBC）：再以0.01ml容量接種環(huán)取肉眼觀察認(rèn)為無菌生長的試管移種一環(huán)于血瓊脂平板作次代培養(yǎng)，經(jīng)35℃培養(yǎng)過夜后觀察最低藥物濃度能殺死99.9%原始種入的細菌即為該菌的MBC。

    稀釋法影響結(jié)果的因素

    （1）培養(yǎng)基：培養(yǎng)基的pH、滲透壓及電解質(zhì)對MIC和MBC均有影響。

    （2）抗菌藥物：抗菌藥物必須采用標(biāo)準(zhǔn)粉劑。配好的藥物原液應(yīng)在有效期內(nèi)使用。

    （3）結(jié)果觀察時間：16～18h觀察，有的細菌在20～24h觀察。培養(yǎng)時間過長，被輕度抑制的部分細菌可重新開始生長；另外由于某些抗菌藥物不夠穩(wěn)定，培養(yǎng)時間過長使其抗菌活性降低，甚至消失，從而使MIC值增高。

    稀釋法測定質(zhì)量控制

    每次實驗時應(yīng)根據(jù)待測菌的不同而分別選用：金黃色葡萄球菌ATCC25923、大腸埃希菌ATCC25922、糞腸球菌ATCC29212和銅綠假單胞菌ATCC27853等標(biāo)準(zhǔn)菌株在同-試驗條件下作平行試驗，常用抗菌藥物對這些標(biāo)準(zhǔn)菌株的MIC應(yīng)在預(yù)期值范圍內(nèi)。超過或低于預(yù)期值范圍一個稀釋度以上，不應(yīng)向臨床發(fā)出報告，應(yīng)檢查出現(xiàn)差錯的原因以及標(biāo)準(zhǔn)菌株被污染和變異的可能性。

    稀釋法殺菌試驗

    臨床實驗室常用的定量評價抗菌藥物殺菌效力的試驗主要包括最低殺菌濃度（MBC）試驗和殺菌曲線法。

    ①最低殺菌濃度　最低殺菌濃度是某抗菌藥物能殺滅99.9%以上的測試菌量的最低藥物濃度。測定方法就是稀釋法MIC測定的基礎(chǔ)上通過再轉(zhuǎn)種、再孵育，最終測得某種抗菌藥物對被測菌的MBC。

    ②時間-殺菌曲線 時間-殺菌曲線主要用于評價一種抗菌藥物對測試菌的殺菌速率，以及兩種或兩種以上抗菌藥物對測試菌的聯(lián)合殺菌活性。操作時培養(yǎng)基和測試菌的準(zhǔn)備等與測定MIC的肉湯稀釋法相同，設(shè)定0h、4h、8h、24h等不同培養(yǎng)時間的試驗管，對每個管均設(shè)立生長對照管，每個試驗管在到達孵育時間后，立即連同生長對照管轉(zhuǎn)種血平板進行菌落計數(shù)。最后將各時間點測得的平均菌落計數(shù)在半對數(shù)坐標(biāo)紙上繪制殺菌曲線。