藥物體外抗菌活性測試方法有哪些

86次 2025.04.08

  體外抗菌實驗指體外條件下,測定細菌/真菌對測試樣品的敏感程度。藥物體外抗菌活性測試主要用于抗菌藥物的篩選、藥物的抗菌譜測定及臨床藥物敏感性試驗等方面。


藥物體外抗菌活性測試


  抑菌實驗與殺菌實驗的區(qū)別


  藥物體外抗菌實驗分為抑菌實驗和殺菌實驗,抑菌實驗可測定僅有抑制細菌/真菌生長繁殖而無殺滅作用的測試樣品;殺菌實驗可測定不僅抑制而且能殺滅細菌/真菌的測試樣品。


  抑菌實驗—測試樣品對細菌是否具有抑制生長作用,測試時培養(yǎng)環(huán)境為培養(yǎng)基,即測試過程中細菌可以繼續(xù)生長繁殖。


  殺菌實驗—測試樣品對細菌是否具有殺滅作用,測試時培養(yǎng)環(huán)境為PBS/生理鹽水,即測試過程中細菌不再生長繁殖。


  藥物體外抗菌活性測試方法


  抑菌實驗方法有OD值法、抑菌圈法、共培養(yǎng)+平板涂布計數(shù)法(一般培養(yǎng)環(huán)境為細菌/真菌培養(yǎng)基)、MIC。


  殺菌實驗方法有共培養(yǎng)+平板涂布計數(shù)法(一般培養(yǎng)環(huán)境為PBS/生理鹽水溶液)、MBC。


  (1)MIC/MBC測試:


  將樣品稀釋成不同濃度(二倍稀釋法),加入到微孔板/無菌試管中,在每個孔/試管中加入一定濃度的測試菌,培養(yǎng)一定時間后肉眼觀察培養(yǎng)液的混濁情況,如果是澄清的,說明沒有細菌的增長,即細菌的生長得到了抑制,培養(yǎng)液澄清的最小樣品濃度為最小抑菌濃度,即MIC。


  然后將澄清孔/管(3個樣品濃度)取出涂布于培養(yǎng)基表面,若無細菌生長,則說明測試的菌已經(jīng)被殺滅,此時的樣品濃度為最小殺菌濃度,即MBC。


 ?。?)平板涂布計數(shù)測試:


  不同材料與菌液共培養(yǎng)一定時間后,不同組別(不同材料、不加材料)的菌液稀釋一定倍數(shù)后涂布平板,以計算出不同組的菌液濃度。


  通過與對照組比較,進而計算出實驗組菌液濃度下降百分比,即得到材料對測試菌株的抗菌性能。


  (3)抑菌圈測試:


  供試材料含可溶性抗菌成分,此成分在瓊脂培養(yǎng)基中可自由擴散,形成一定濃度的含藥區(qū)域。由于各種微生物對不同材料或同一材料不同濃度的敏感性不同,因而形成不同大小直徑的抑菌圈。


 ?。?)OD值測試:


  細菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成正比,通過OD值可以定性反映出微生物的濃度或數(shù)量。


  不同材料按比例與菌液共培養(yǎng)一定時間后,通過比較不同組別(不同材料、不加材料)菌液OD值之間的大小來判斷不同材料的抗菌性能。


  藥物體外抗菌活性測試菌株


  標準菌株常用的是金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、粘性放線菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌等。


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